產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 產(chǎn)品僅用于科研即開(kāi)即用,用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
產(chǎn)品名稱 | 李斯特菌通用PCR檢測(cè)試劑盒哪家代理 |
英文名稱 | Listeria spp.PCR |
分類 | PCR檢測(cè)試劑盒 |
運(yùn)輸及保存:
李斯特菌通用PCR檢測(cè)試劑盒哪家代理低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見(jiàn)使用方法)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對(duì)照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,產(chǎn)品僅用于科研只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用10μL上步制備的PCR陽(yáng)性對(duì)照的第4號(hào)(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬(wàn)拷貝)或第5號(hào)(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加):
L-谷氨酸鉀鹽/L-谷氨酸鉀鹽單水合物/Potassium L-glutamateBR,98%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6382-01-0RT
2-氨基-1-苯乙醇/2-氨基-1-苯基乙醇/苯基乙醇胺/S/R-苯甘氨醇/2-Ami-phenylethanolBR,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,7568-93-6RT
順式-D-羥脯氨酸/順式-4-羥基-D-脯氨酸/4-羥基脯胺基乙酸/別羥基-D-脯氨酸/順式-D-別羥脯氨酸/4-羥基脯氨酸/順-4-羥基-D-脯氨酸/cis-4-Hydroxy-D-prolineBR,99%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,2584-71-6RT
S-腺苷蛋氨酸/S-腺甘基蛋氨酸/腺苷蛋氨酸/S-腺苷甲硫胺酸/S-腺苷甲硫氨酸對(duì)甲苯磺酸鹽/S-腺甙甲硫氨酸對(duì)甲苯磺酸鹽/S-腺苷蛋氨酸對(duì)甲苯磺酸鹽/S-腺苷L-蛋氨酸對(duì)甲苯磺酸鹽/AdoMetBR,80%100毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,17176-17-9保存:-20℃
L-類胱氨酸/L-同型胱氨酸/L-4,4'-二硫雙(2-氨基丁酸)/L-高胱氨酸/L-同型半胱氨酸/L-HomocystineBR,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,626-72-2RT
L-胱硫醚/(R)-S-(2-氨基-2-羧乙基)-L-半胱氨酸/L-CystathionineBR,90%10毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,56-88-2保存:-20℃
半胱氨酰甘氨酸/H-半胱氨酸-甘氨酸-OH/半胱-甘氨酸/L-半胱氨酸-甘氨酸/Cys-GlyBR,98%100毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,19246-18-5保存:-20℃
ε-聚賴氨酸/聚賴氨酸/ε-PLBR,95%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
DL-高半胱氨酸硫酸內(nèi)酯鹽酸鹽/DL-高半胱氨酸硫內(nèi)脂鹽酸鹽/DL-高半胱氨酸硫內(nèi)酯鹽酸鹽/混旋-高胱氨酸硫羥乙酮/高半胱氨酸硫內(nèi)酯鹽酸鹽/DL-高半胱氨酸硫醇內(nèi)酯鹽酸鹽/DL-Homocysteine thiolactone hydrochlorideBR,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,6038-19-3RT
DL-高胱氨酸/DL-4,4ˊ-二硫雙(2-氨基丁酸)/DL-類胱氨酸/DL-同型胱氨酸/類硫氨酸/DL-4,4'-二硫二(2-氨基丁酸)/DL-HomocystineBR,98%10克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,870-93-9RT
雙(2-氧代-3-惡唑烷基)次磷酰氯/雙(2-氧代'-3-惡唑烷基)次磷酰氯;二(2-氧代-3-唑烷基)次磷酰氯/BOP-CL
叔丁氧羰基-甲苯磺酰基-精氨酸/ Nα-BOC-Nω-TOSYL-L-精氨酸;BOC-D-芐磺?;彼幔籒-叔丁氧羰基-N'-甲苯磺?;?L-精氨酸;BOC-D-甲苯磺?;?精氨酸;BOC-甲苯磺酰基-精氨酸;Nα-叔丁氧羰?;鵑Ω-對(duì)甲苯磺?;鵏-精氨酸/Boc-Arg(Tos)-OH
N-芴甲氧羰基-N'-甲苯磺?;?L-精氨酸/Nα-FMOC-Nω-TOSYL-L-精氨酸;FMOC-對(duì)甲苯磺酰-精氨酸;N-芴甲氧羰基-甲苯磺酰基-精氨酸;FMOC-Nω-(4-甲基磺酰)-L-精氨酸;Nα-(9-芴甲氧羰基)-NΩ-甲苯磺酰基-L-精氨酸/Fmoc-Arg(Tos)-OH
Nα-FMOC-Nω-PBF-D-精氨酸/ N5-[[[(2,3-二氫-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-基)磺酰]氨基]亞氨甲基]-N2-芴甲氧羰基-D-鳥(niǎo)氨酸;保護(hù)精氨酸;芴甲氧羰酰-D-精氨酸;N'-[(2,3-二氫-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-基)磺酰基]-N-芴甲氧羰基-D-精氨酸/Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH
李斯特菌通用PCR檢測(cè)試劑盒哪家代理TB培養(yǎng)基粉劑(Terrific Broth),1L2,6-DICHLOROBENZENESULFONYL CHLORIDE 質(zhì)量規(guī)格:≥97%(T),BR
TB培養(yǎng)基(Terrific Broth),500mlFluticasone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
YPD/YEPD固體培養(yǎng)基粉劑,1L2-Piperidone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%
YPD/YEPD培養(yǎng)基粉劑,1LBOC-D-MEPHE-OH DCHA 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
YPD/YEPD培養(yǎng)基,500ml2-HEXANOL 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
YT培養(yǎng)基粉劑(2×),1LN-(4-Methylphenyl)-3-oxobut* 質(zhì)量規(guī)格:≥98%
YT培養(yǎng)基(2×,pH7.0),500ml6-Fluoro-1-indanone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
穿刺培養(yǎng)基,10*2ml4,4'-Diaminobenzophenone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
技術(shù)特點(diǎn):
1產(chǎn)品僅用于科研準(zhǔn)確可靠,臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)>1000例,結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì),結(jié)果*性大于99%。
2高靈敏:可檢測(cè)低至10ng的人基因組DNA。
3快速:整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí)。
4簡(jiǎn)便:試劑盒提供預(yù)混好的試劑,使體系配置操作簡(jiǎn)便。
5防污染
6高特異性:雙重特異性組成,保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需*配對(duì),才能延伸。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì),在延伸中產(chǎn)生熒光。
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